Aktualitások

  • Aktualitások

    Qiagen

    Leica Digitális Mikroszkópok

    Részletek itt...

    QIAGEN Piroszekvenáló

    Gyors és pontos szekvenciaanalízis.

    Részletek itt...

    QIAGEN/Corbett Research

    real-time PCR készülék, PCR összemérő és újabb nukleinsav izoláló

    Részletek itt...

Keresés

Vector logó

Vector epitóp jelölők és

fúziós fehérje termékek


Fúziós fehérjék és jelentőségük

Amennyiben a vizsgált fehérje kis mennyiségben található, ami nem elegendő jellemzésre, antitest termeltetésre vagy terapeutikai célra, akkor rekombináns technikát alkalmazhatunk. Egy ismert fehérje vagy peptid DNS szekvenciájához fúzionáltathatjuk a target fehérje nukleotid sorrendjét. Ekkor fúziós fehérje jön létre (az ismert és target fehérje fúziós terméke). Ezt a rekombináns fehérjét nagy mennyiségben termeltethetjük mikroorganizmus tenyészetben.

Hogyan használhatók a Pro-Fusion™ termékek

Amikor szükség van egy target fehérjére, akkor a fehérjét kódoló DNS szakaszt egy ismert fehérje (GFP vagy MBP) kódoló szakaszához vagy pedig egy kimutatható fehérje vagy tag (pl. HA vagy c-Myc) kódoló szakaszához fúzionáltatják. Ezt a rekombináns DNS-t bejuttatják egy mikroorganizmusba, amely megnyilvánítja (expresszálja) a target fehérjét, együtt az ismert jelölő vagy fúziós partnerrel. A target fehérje izolálásához vagy detektálásához az ismert fehérje vagy tag kimutatása vagy izolálása is elég, azzal együtt a célfehérje is tisztítható, kimutatható. A Fusion-Aid™ kitekkel lehetséges a fúziós termékek izolálása. A fúziós fehérje hozzákötődik a megfelelő agarózhoz kötött antitesthez (spin oszlopon) és így elválasztható a többi fúziós partnert nem tartalmazó fehérjétől a tenyészet felülúszójából vagy a sejt lizátumból. Biotinilált anti-MBP, anti-GFP, anti-HA és anti-cMyc használható a fúziós fehérje izolálására illetve Western blot-os detektálására. Ha a fúzisó fehérje szövetben expresszálódik, akkor a kimutatáshoz használható a tag kimutatsára szolgáló antitest. Ezzel a target fehérje szöveti lokalizálása megoldható.

Protein tagging (cimkézési) technikák:

A GFP és MBP két olyan fehérje, amelyet gyakorta használnak fúziós fehérjék előállítására. E két fehérje DNS kódoló szakaszához fúzionálják a target fehérje kódolós szekvenciáját. Amikor a szervezet termeli a target fehérjét, azzal együtt a cimke (tag, GFP vagy MBP) is expresszálódik. A cimke/tag kimutatásával a célfehérjénk is kimutatható. Ebben az esetben a cimkére/tag-re specifikus antitest használható.

Epitóp cimke/tag technika:

A fenti technikához hasonlóan ebben az esetben nem egy fehérje, hanem annak egy epitópja (peptid) lesz a fúziós partner. (A fúzió ebben az esetben is a DNS kódoló szakaszok fúziójával és azok expressziójával valósul meg.) A célfehérje így az epitóp kimutatásával követhető. Az epitóp lehet HA, vagy c-Myc. Ezek kimutatása pedig anti-HA vagy anti-cMyc antitesttel lehetséges, illetve tisztításhoz felülúszóból vagy sejtlizátumból a két antitesttel konjugáltatott agaróz szolgál. A biotinilált antitestek használhatók a target fehérje Western blot-os kimutatásához, illetve szöveti expresszió esetén a szövetben is kimutathatók.

Termékek:

  • Biotinilált anti-c-Myc
  • Biotinilált anti GFP
  • Biotinilált anti HA (humán influenza hemagglutinin)
  • Biotinilált anti MBP (maltóz kötő fehérje)
  • Biotinilált anti polihisztidin
  • Peroxidáz jelölt anti GFP
  • Rekombináns GFP standard
  • Konjugálatlan agaróz gyöngyök
  • Vector Fusion-Aid c-Myc kit (agaróz anti c-Myc)
  • Vector FusionAid GFP kit (agaróz anti GFP)
  • Vector Fusion-Aid HA kit (agaróz anti-HA)
  • Vector Fusion-Aid MBP kit (agaróz anti maltóz kötő fehérje)

További (angol nyelvű) információ....